靶點結合分析平臺
HTRF
均相時間分辨熒光技術(homogeneous time-resolved fluorescence),是一種用來檢測純液相體系中待測物的技術。該技術基于熒光共振能量轉移(FRET,Fluorescence resonance energy transfer)和時間分辨熒光(TRF,Time-Resolved Fluorescence)兩大技術。將TRF的低背景特點和FRET的均相實驗方式融合在一起,使得實驗靈活可靠、靈敏度高、通量大、假陽性低。在HTRF實驗中,當供體和受體相離很近時,會有熒光共振能量轉移而產生信號。
HTRF的能量供體是銪(Eu)和鋱(Tb)的穴狀化合物。在這個穴狀化合里,Eu和Tb被永久地嵌合在一個籠子里,結構非常穩定。HTRF的能量受體也有兩種,XL665和d2。
HTRF技術被廣泛應用于細胞實驗,并應用于藥物研發的不同階段,從實驗方法的建立、高通量篩選、lead到hit、到臨床前研究,這是一種很靈敏且穩定的技術。自從該技術進入藥物研發領域以來,加快了很多研究的步伐。包括GPCR(受體配體結合、cAMP和IP-1的檢測、磷酸化ERK的定量等)、激酶、抗體研究等。此外,該技術也適用于蛋白和蛋白、蛋白和多肽、蛋白和DNA/RNA相互作用的實驗。
GPCR藥物篩選與分析
G蛋白偶聯受體(Gprotein-coupledreceptor,GPCR)約有800-1000個成員,是迄今發現的最大的多藥物靶點的受體超家族,其激動劑或拮抗劑常被用于治療各種疾病,在藥物研發中扮演者重要角色。Scilia能夠為客戶提供GPCR藥物篩選和發現服務。可以根據客戶提供的化合物庫和構建的GPCR靶點細胞系依托于高通量(HTS)篩選技術進行GPCR結合分析和IC50檢測。結合是GPCRs發揮功能的第一步,對其親和力的測定是藥物研發不可缺少的部分。GPCR結合實驗可以進行配體結合分析,受體與配體分別被熒光基團標記,結合后可激發產生能量轉移(FRET)信號,進而計算IC50、Ki、Kd等參數,主要檢測化合物與目標靶點的結合能力。GPCR功能分析試驗可以對鈣流、第二信使(cAMP、IP-1)等相關功能性分析試驗,分析化合物對靶點的激活和抑制作用。
激酶藥物篩選與分析
激酶(Kinase)包括蛋白激酶、磷酸酶和磷酸二酯酶。蛋白激酶是通過共價調節的方式將磷酸基團轉移到其他蛋白上發揮功能的,從高能供體分子(如ATP)轉移磷酸基團到特定靶分子(底物)的酶,這一過程謂之磷酸化。它們是激酶藥篩靶點分子中的最大一類。激酶介導的信號傳導途徑的異常調節是造成人類主要病理狀況的原因,例如癌癥、心血管疾病、神經退行性疾病和代謝紊亂。因而,激酶上述的特征使其成為藥物研發和篩選中的重要靶點。Scilia根據客戶提供的待測靶點化合物,開展相應的篩選和檢測服務。細胞內的激酶,在藥物的作用下,發揮催化活性,引起細胞內的蛋白變化,通過各種檢測方法,探討藥物的作用機理。檢測方法:激酶穩定細胞系構建,激酶活性評價,化合物結合試驗,蛋白互作檢測等。